П атфа: АФП (альфа-фетопротеин), сдать анализ на АФП в п. Ордынское, цены в лаборатории Инвитро

АФП (альфа-фетопротеин), сдать анализ на АФП в п. Ордынское, цены в лаборатории Инвитро

Метод определения
Иммуноферментный анализ.

Исследуемый материал
Сыворотка крови

Альфа-фетопротеин (АФП) относится к гликопротеинам с молекулярной массой около 70 кДа. Период полураспада составляет около семи суток. 

АФП начинает вырабатываться с 5-й недели внутриутробного развития сначала в желточном мешке, затем в печени плода. На 13-й неделе развития плода он является основным белком плазмы крови. Альфа-фетопротеин структурно сходен с альбумином и выполняет в организме плода аналогичные функции: поддержание онкотического давления крови плода; предохранение плода от иммунной агрессии материнского организма; связывание материнских эстрогенов и пр. К моменту родов уровень АФП в крови плода снижается и составляет примерно 1% от максимального уровня. В течение первого года жизни уровень альфа-фетопротеина приближается к значениям, характерным для взрослого человека (

В кровь матери этот белок поступает из амниотической жидкости и через плаценту. Обмен альфа-фетопротеина между плодом и околоплодными водами и его поступление в кровь матери зависит от состояния почек, желудочно-кишечного тракта плода и от проницаемости плацентарного барьера. В крови матери уровень АФП начинает увеличиваться после 10-й недели гестации и достигает максимума примерно на 30-й неделе, затем снижается.

Альфа-фетопротеин – неспецифический маркер состояния плода. Отклонения развития плода (в частности, открытые дефекты нервной трубки) обуславливают увеличенный выход плазмы крови плода в амниотическую жидкость с повышением содержания АФП в материнской крови. 

Хромосомные нарушения, такие как синдром Дауна, сопровождаются снижением уровня альфа-фетопротеина. 

Во многих случаях изменения содержания альфа-фетопротеина связаны с наличием акушерской патологии у матери. Поэтому определение АФП во второй половине беременности нужно проводить в комплексе с плацентарными гормонами с целью оценки состояния фетоплацентарной системы и сопровождать УЗИ-исследованием для исключения неправильного определения срока беременности, многоплодной беременности, явных пороков развития.  

Определение уровня альфа-фетопротеина совместно с β-ХГЧ (см. тест № 189) и свободным эстриолом (см. тест № 134) входит в состав так называемого «тройного теста», выявляющего риск отклонений развития плода (проводится между 15-й и 22-й неделями беременности).

Другая важная область применения альфа-фетопротеина – использование его в качестве онкомаркера. АФП относят к онкофетальным антигенам – ассоциированным с опухолями антигенам, характерным в норме для эмбриональных тканей. У взрослых их концентрация в крови выявляется лишь при регенеративных процессах, злокачественной или доброкачественной пролиферации клеток органов, в которых они синтезируются у эмбриона. У взрослых увеличение концентрации альфа-фетопротеина чаще всего является следствием хронических гепатитов (у 30% пациентов увеличение обычно менее чем в 10 раз от нормального значения, но иногда до 25-кратного повышения), гепатоцеллюлярной карциномы (у 80-90% пациентов, обычно более чем в 100 раз выше нормы). При злокачественных опухолях других органов с метастазами в печень уровень альфа-фетопротеина может повышаться до уровня не более 500 Ед/мл, у этих пациентов обычно значительно повышен уровень раково-эмбрионального антигена (см. тест № 141). Таким образом, определение двух онкомаркеров в сочетании помогает дифференцировать первичный рак печени с метастатическим ее поражением. Повышение альфа-фетопротеина отмечается при наличии опухолей герминативных клеток (примерно у 40% пациентов). При проведении терапии опухолей для обнаружения достоверного снижения уровня целесообразно проводить определение альфа-фетопротеина один раз в месяц.

Исследование АФП в сыворотке крови используют в диагностике гепатоцеллюлярного рака печени, герминогенных опухолей яичек или яичников. В рамках скрининга 2-го триместра беременности тест назначают для выявления некоторых видов патологии плода.

Альфа нормикс табл п о пленочн 200 мг x36

ИНСТРУКЦИЯ

по медицинскому применению препарата

АЛЬФА НОРМИКС®

Регистрационные номера:

Таблетки, покрытые пленочной оболочкой: ЛС-001993

Гранулы для приготовления суспензии для приема внутрь: ЛС-001994

Торговое название препарата: Альфа Нормикс®

Международное непатентованное название (МНН): рифаксимин. Лекарственные формы:

Таблетки, покрытые пленочной оболочкой.

Гранулы для приготовления суспензии для приема внутрь.

Состав:

Каждая таблетка, покрытая пленочной оболочкой, содержит:

Активное вещество: рифаксимин с полиморфной структурой альфа 200 мг.

Вспомогательные вещества: карбоксиметилкрахмал натрия 15 мг, глицерил пальмитостеарат 18 мг, кремния диоксид коллоидный 1 мг, тальк 1 мг, целлюлоза микрокристаллическая 115 мг. Пленочная оболочка: гипромеллоза 5,15 мг, титана диоксид (Е171) 1,5 мг, динатрия эдетат 0,02 мг, пропиленгликоль 0,5 мг, оксид железа красный (Е172) 0,15 мг.

Гранулы для приготовления суспензии для приема внутрь в 1 флаконе (60 мл) содержат:

Активное вещество: рифаксимин с полиморфной структурой альфа 1,2 г

Вспомогательные вещества: целлюлоза микрокристаллическая 70 мг, кармеллоза натрия 710 мг, пектин 780 мг, каолин 4,002 г, натрия сахаринат 60 мг, натрия бензоат 36 мг, сахароза 17,280 г, ароматизатор вишневый (дикой черешни) 240 мг.

Описание:

Круглые, двояковыпуклые таблетки розового цвета, покрытые пленочной оболочкой.

Гранулы оранжевого цвета с запахом и вкусом вишни (дикой черешни). Фармакотерапевтическая группа: антибиотик, рифаксимин.

Код АТХ: [А07АА11].

Фармакологические свойства

Фармакодинамика

Рифаксимин — антибиотик широкого спектра действия из группы рифамицина. Как и другие представители этой группы, необратимо связывает бета субъединицы фермента бактерий ДНК-зависимой РНК полимеразы и,

следовательно, ингибирует синтез РНК и белков бактерий.&nbsp,

В результате необратимого связывания с ферментом, рифаксимин проявляет бактерицидные свойства в отношении чувствительных бактерий. Препарат обладает широким спектром противомикробной активности, включающим большинство грамотрицательных и грамположительных, аэробных и анаэробных бактерий.

Широкий антибактериальный спектр рифаксимина способствует снижению патогенной кишечной бактериальной нагрузки, которая обуславливает некоторые патологические состояния.

Препарат снижает:

роста микроорганизмов в кишечнике,

-&nbsp,&nbsp,&nbsp, присутствие в дивертикуле ободочной кишки бактерий, которые могут вызывать воспаление внутри и вокруг дивертикулярного мешка и, возможно, играют ключевую роль в развитии симптомов и осложнений дивертикулярной болезни,

-&nbsp,&nbsp,&nbsp, антигенный стимул, который при наличии генетически обусловленных дефектов в иммунорегуляции слизистой и/или в защитной функции, может инициировать или постоянно поддерживать хроническое воспаление кишечника,

Механизм резистентности

Развитие резистентности к рифаксимину обусловлено обратимым повреждением гена rpoB, который кодирует бактериальную РНК полимеразу. Встречаемость резистентных субпопуляций среди бактерий, выделенных у пациентов с диареей путешественника, была низкой.

По данным клинических исследований, трехдневный курс терапии рифаксимином у пациентов с диареей путешественника не сопровождался появлением резистентных грамположительных (энтерококков) и грамотрицательных (кишечная палочка) бактерий. При повторном применении рифаксимина в высоких дозах у здоровых добровольцев и у пациентов с воспалительными заболеваниями кишечника резистентные к рифаксимину штаммы появлялись, однако, они не колонизировали желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) и не вытесняли рифаксимин-чувствительные штаммы. &nbsp,

При прекращении терапии резистентные штаммы быстро исчезали. Экспериментальные и клинические данные позволяют предполагать, что применение рифаксимина у пациентов с диареей путешественника и скрытой инфекцией Mycobacterium tuberculosis и Neisseria meningitidis не будет сопровождаться отбором рифампицин-резистентных штаммов.

Чувствительность

Тестирование чувствительности in vitro не может использоваться для определения чувствительности или резистентности бактерий к рифаксимину. &nbsp,В настоящее время клинических данных недостаточно, чтобы установить предельные значения для оценки тестов на чувствительность. Рифаксимин оценивали in vitro в отношении возбудителей диареи путешественника из четырех регионов мира: энтеротоксигенных и энтероагрегативных штаммов E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., нехолерных вибрионов, Plesiomonas spp., Aeromonas spp. и Campylobacter spp. МПК90 (минимальная подавляющая концентрация) для выделенных штаммов составила 32 мкг/мл, и этот уровень легко достижим в просвете кишечника в результате высокой концентрации рифаксимина в фекалиях. Поскольку рифаксимин в полиморфной форме альфа обладает низкой всасываемостью из ЖКТ и действует местно в просвете кишечника, то он может быть клинически неэффективен в отношении инвазивных бактерий, даже если эти бактерии чувствительны к нему in vitro.

Фармакокинетика

Всасывание

Рифаксимин в полиморфной форме альфа практически не всасывается при приёме внутрь (менее 1%). При повторном применении у здоровых добровольцев и у пациентов с поврежденной слизистой оболочкой кишечника, при воспалительных заболеваниях кишечника концентрация в плазме очень низкая (менее 10 нг/мл). При применении препарата через 30 минут после приема жирной пищи отмечали не имеющее клинической значимости повышение системного всасывания рифаксимина.

Распределение

Рифаксимин умеренно связывается с белками плазмы. Связь с белками у здоровых добровольцев составляет 67.5%, а у пациентов с печеночной недостаточностью 62%.

Выведение

Выводится из организма в неизмененном виде кишечником (96.9% от принятой дозы), так как не подвергается деградации и метаболизму при прохождении через ЖКТ. Обнаруживаемый с помощью меченых изотопов в моче, рифаксимин составляет не более 0,025% от принятой внутрь дозы. Менее 0,01% от дозы выводится почками в виде 25-дезацетилрифаксимина, единственного метаболита рифаксимина, идентифицированного у человека. Выведение почками 14С рифаксимина не превышает 0.4%. Системная экспозиция нелинейная, дозозависимая, что сопоставимо с всасыванием рифаксимина, возможно, ограниченным скоростью растворения.

Особые группы пациентов

С почечной недостаточностью

Нет клинических данных о применении рифаксимина при почечной недостаточности.

С печеночной недостаточностью

Системная экспозиция у пациентов с печеночной недостаточностью превышает таковую у здоровых добровольцев. Повышение системной экспозиции у этих пациентов следует рассматривать в свете локального действия рифаксимина в кишечнике и его низкой системной биодоступности, а также имеющихся данных по безопасности рифаксимина у пациентов с циррозом печени.

Дети

Фармакокинетика рифаксимина у детей не изучалась.

Показания к применению

Лечение желудочно-кишечных инфекций, вызываемых бактериями, чувствительными к рифаксимину, например, при острых желудочно-кишечных инфекциях, диареи путешественников, синдроме избыточного роста микроорганизмов в кишечнике, печёночной энцефалопатии, симптоматическом неосложнённом дивертикулёзном заболевании ободочной кишки и хроническом воспалении кишечника.

Профилактика инфекционных осложнений при колоректальных хирургических вмешательствах.

Противопоказания

С осторожностью

Почечная недостаточность, одновременное применение с пероральными контрацептивами, одновременное применение с ингибитором Р-гликопротеина, таким как циклоспорин.

Применение при беременности и в период лактации

Данные о применении Альфа Нормикса при беременности весьма ограничены. Исследования на животных показали преходящее влияние рифаксимина на оссификацию и строение скелета у плода. Клиническая значимость этих результатов неизвестна.

Применение Альфа Нормикса при беременности не рекомендуется.

Неизвестно, проникает ли рифаксимин в грудное молоко. Нельзя исключить риска для ребенка, находящегося на грудном вскармливании. Для решения вопроса о продолжении приема рифаксимина в период грудного вскармливания необходимо оценить соотношение риска для ребенка и пользы для матери.

Способ применения и дозы

Принимать внутрь, запивая стаканом воды, независимо от приема пищи.

Лечение диареи

Взрослые и дети старше 12 лет: 1 таблетка по 200 мг или 10 мл суспензии (что эквивалентно 200 мг рифаксимина) каждые 6 часов. Лечение диареи путешественника не должно превышать 3 дней.

Печеночная энцефалопатия:

Взрослые и дети старше 12 лет: 2 таблетки по 200 мг или 20 мл

суспензии (что эквивалентно 400 мг рифаксимина) каждые 8 часов. Профилактика постоперационных осложнений при колоректальных хирургических вмешательствах:

Взрослые и дети старше 12 лет: 2 таблетки по 200 мг или 20 мл суспензии (что эквивалентно 400 мг рифаксимина) каждые 12 часов.

Профилактику проводят за 3 дня до операции.

Синдром избыточного бактериального роста:

Взрослые и дети старше 12 лет: 2 таблетки по 200 мг каждые 8-12 часов.

Симптоматический неосложненный дивертикулез:

Взрослые и дети старше 12 лет: 1- 2 таблетки по 200 мг или от 10 до 20 мл суспензии (что эквивалентно 200 — 400 мг рифаксимина) каждые 8-12 часов.

Хронические воспалительные заболевания кишечника:

Взрослые и дети старше 12 лет: 1- 2 таблетки по 200 мг или от 10 до 20 мл суспензии (что эквивалентно 200 — 400 мг рифаксимина) каждые 8-12 часов.

Продолжительность лечения Альфа Нормиксом не должна превышать 7 дней. Повторный курс лечения следует проводить не ранее, чем через 20 — 40 дней. Общая продолжительность лечения определяется клиническим состоянием пациентов. По рекомендации врача могут быть изменены дозы и частота их приёма.

Коррекция дозы у пациентов пожилого возраста и у пациентов с печеночной и почечной недостаточностью не требуется.

Приготовление суспензии

Гранулы для приготовления суспензии для приёма внутрь находятся в герметически закрытом флаконе. Для приготовления суспензии необходимо

открыть флакон, добавить воду до метки и хорошо встряхнуть флакон. Добавить воду повторно до тех пор, пока уровень суспензии не достигнет указанной отметки 60 мл.

Концентрация рифаксимина в приготовленной суспензии составляет 100 мг в 5 мл. Перед употреблением суспензию хорошо взболтать. Отмеривать готовую суспензию мерной чашечкой, имеющейся в упаковке.

Побочное действие

Побочные эффекты классифицированы по частоте встречаемости следующим образом: очень часто (≥1/10), часто (≥1/100 — ˂1/10), нечасто (≥1/1000 — ˂1/100), редко (≥1/10000 — ˂1/1000), очень редко (˂1/10000), неизвестно (частота не может быть установлена на основании имеющихся данных).

Со стороны сердечно-сосудистой системы:

Нечасто: ощущение сердцебиения, «приливы» крови к коже лица, повышение артериального давления.

Со стороны крови: &nbsp,

Нечасто: лимфоцитоз, моноцитоз, нейтропения.

Неизвестно: тромбоцитопения.

Со стороны иммунной системы:

Неизвестно: анафилактические реакции, гиперчувствительность, анафилактический шок, отек гортани.

Метаболические нарушения:

Нечасто: снижение аппетита, дегидратация.

Психические нарушения:

Нечасто: патологические сновидения, депрессивное настроение, бессонница, нервозность.

Со стороны центральной нервной системы:

Часто: головокружение, головная боль.

Нечасто: гипестезия, мигрень, парестезия, сонливость, головная боль а области пазух носа.

Неизвестно: предобморочное состояние, возбуждение.

Со стороны органа зрения:

Нечасто: диплопия.

Со стороны внутреннего уха:

Нечасто: боль в ухе, системное головокружение.

Со стороны органов дыхания:

Нечасто: одышка, сухость в горле, заложенность носа, боль в ротоглотке, кашель, ринорея.

Со стороны желудочно-кишечного тракта и печени:

Часто: вздутие живота, боль в животе, запор, диарея, метеоризм, тошнота, тенезмы, рвота, позывы на дефекацию.

Нечасто: боль в верхней половине живота, асцит, диспепсия, нарушение моторики желудочно- кишечного тракта, выделение слизи и крови со стулом, сухость губ, «твердый» стул, повышение активности &nbsp,аспартатаминотрансферазы, агевзия.

Неизвестно: нарушение печеночных функциональных тестов, изжога.

Со стороны мочевыделительной системы:

Нечасто: глюкозурия, полиурия, поллакиурия, гематурия, протеинурия.

Со стороны&nbsp,&nbsp, кожи и подкожно-жировой клетчатки:

Нечасто: сыпь, солнечный ожог.

Неизвестно: ангионевротический отек, аллергический дерматит, эксфолиативный дерматит, экзема, эритема, зуд, пурпура, крапивница, эритематозная сыпь, эритема ладоней, зуд половых органов.

Со стороны опорно-двигательного аппарата:

Нечасто: боль в спине, мышечный спазм, мышечная слабость, миалгия, боль в шее.

Инфекции:

Нечасто:кандидоз, простой герпес, назофарингит, фарингит, инфекции

верхних дыхательных путей.

Неизвестно: клостридиальная инфекция.

Со стороны репродуктивной системы:

Нечасто: полименорея.

Общие симптомы:

Часто: лихорадка.

Нечасто: астения, боль и неприятные ощущения неопределенной локализации, озноб, холодный пот, гриппоподобные симптомы, периферические отеки, гипергидроз, отек лица, усталость.

Лабораторные исследования: изменение международного нормализованного отношения.

Передозировка

По данным клинических исследований, у пациентов с диареей путешественника дозы рифаксимина до 1800 мг/день хорошо переносились.

Даже у пациентов с нормальной бактериальной флорой кишечника рифаксимин в дозе до 2400 мг/день в течение 7 дней не вызывал неблагоприятных симптомов. При случайной передозировке показана симптоматическая и поддерживающая терапия.

Взаимодействие с другими лекарственными средствами

Исследования in vitro показывают, что рифаксимин не ингибирует изоферменты системы цитохрома Р-450 (CYP1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1 и 3A4) и не индуцирует CYP1A2 и CYP2B6, но является слабым индуктором CYP3A4. Клинические исследования лекарственного взаимодействия свидетельствуют, что у здоровых добровольцев рифаксимин не оказывает значительного влияния на фармакокинетику лекарственных средств, метаболизирующихся с участием СYP3A4. У пациентов с нарушением функции печени нельзя исключить, что рифаксимин может снизить экспозицию лекарственных средств субстратов СYP3A4 (например, варфарин, противоаритмические, противосудорожные и т.д.) при одновременном применении с ними, так как при печёночной недостаточности имеет более высокую системную экспозицию по сравнению со здоровыми добровольцами.

У пациентов, продолжающих приём варфарина и рифаксимина, регистрировали снижение и повышение международного нормализованного отношения (в некоторых случаях с эпизодами кровотечений). Если совместный приём препаратов необходим, следует проводить тщательный мониторинг международного нормализованного отношения в начале и по окончании лечения. Для поддержания желаемого уровня антикоагуляции может понадобиться подбор дозы пероральных антикоагулянтов.

Исследования in vitro позволяют предполагать, что рифаксимин является умеренным субстратом Р-гликопротеина и метаболизируется с помощью изофермента CYP3A4.

Неизвестно, повышают ли системную экспозицию рифаксимина лекарственные средства, которые ингибируют CYP3A4 при одновременном применении с ним.

У здоровых добровольцев совместный приём разовой дозы циклоспорина (600 мг), мощного ингибитора P-гликопротеина, и разовой дозы рифаксимина (550 мг) приводил к 83-кратному и 124-кратному увеличению средних значений Cmax и AUC∞ рифаксимина. Клиническая значимость такого повышения для системного воздействия не известна.

Потенциальные взаимодействия рифаксимина с другими лекарственными средствами, которые выводятся из клетки с помощью Р-гликопротеина или других транспортных белков (MRP2, MRP4, BCRP, BSEP), маловероятны.

Особые указания

Хотя головокружение и сонливость наблюдаются при применении препарата Альфа Нормикс®, однако, он не оказывает существенного влияния на способность управлять автотранспортом и заниматься видами деятельности, требующими повышенного внимания и быстроты психомоторных реакций. В случае появления головокружения и сонливости при применении препарата, следует воздержаться от выполнения указанных видов деятельности.

Форма выпуска

Таблетки покрытые пленочной оболочкой 200 мг. 12 или 14 таблеток в блистере из ПВХ/ПЭ/ПВДХ, приваренному к алюминиевой фольге.

По 1,2,3 или 5 блистеров (12,14,28,36, 42 или 60 таблеток) вместе с инструкцией по применению в картонной пачке.

Гранулы для приготовления суспензии для приёма внутрь 100 мг/5 мл. Флакон из темного стекла, закрытый алюминиевым завинчивающимся колпачком, вместе с мерной чашечкой и инструкцией по применению в картонной пачке.

Условия хранения

При температуре не выше 30 °С.

Хранить в местах, недоступных для детей.

Срок годности

3 года.

Срок годности приготовленной суспензии: 7 дней при комнатной температуре не выше 30 °С.

Не использовать позже срока, указанного на упаковке.

Условия отпуска из аптек: По рецепту.

Производитель

Альфасигма С.п.А., Италия

Виа Э. Ферми 1, 65020 Аланно (Пескара), Италия / Via E. Fermi 1, 65020 Alanno (Pescara), Italy

Претензии потребителей и рекламации по качеству препарата принимаются по адресу: ООО «Альфасигма Рус», Россия

125009 Россия, г. Москва, Тверская, д. 22/2, корп. 1, 4 этаж, пом. VII, комн. 1. Тел: +7 (495) 225-3626, эл. адрес: [email protected]

Функциональный анализ гена atfA в ответ на стресс у патогенного термодиморфного гриба Penicillium marneffei

Таблица 1.

Праймеры для ПЦР, используемые в этом исследовании.

Подробнее »

Расширять

Фигура 1.


Стратегия делеции гена atfA путем замены всей ORF atfA двумя фрагментами ДНК с использованием модифицированного метода разделения маркеров.

(A) Для первого фрагмента ДНК проводят ПЦР-амплификацию 500 нуклеотидов гена atfA с 5′-фланкирующим участком из геномной ДНК дикого типа. Продукт ПЦР лигируют с pAN7-1, содержащей ген hph . Фрагмент ДНК, содержащий 500 нуклеотидов гена atfA с 5′-фланкирующим участком и гена hph без терминатора ( hph ), получен расщеплением рекомбинантной плазмиды Hin dIII и Бам Привет. Для второго фрагмента амплифицировали 3′ atfA , фланкирующую область atfA , и продукт ПЦР использовали в качестве матрицы с pAN7-1 во втором цикле ПЦР. Форма продукта на этом этапе ПЦР состоит из 3′ фланкирующей области atfA и укороченной последовательности гена hph ( ph ) с терминатором. Затем два фрагмента ДНК трансформируют в штамм P. marneffei дикого типа с получением мутантного штамма atfA . Праймеры, использованные для конструирования мутантов, и предсказанные результаты трех гомологичных рекомбинаций 5′ и 3′ 9Показаны фланкирующие области 0017 atfA и гена hph в локусе P. marneffei atfA в методе расщепленной рекомбинации маркеров (B). делеция гена atfA в мутантном штамме atfA (Δ atfA ) по сравнению со штаммом дикого типа (WT). Положения зонда, характерного для обеих 3′-фланкирующих областей atfA 9Идентифицируются ген 0012 (серая полоса) и ген hph (пустая полоса). EV представляет собой Eco RV. (C) Результат Саузерн-блот-гибридизации. Зонд, содержащий 0,8 т.п.н. фрагмент 3′-фланкирующей области гена atfA и 1,5 т.п.н. фрагмент гена hph , гибридизованный с 5,6 т.п.н. Eco RV-переваренная ДНК из мутантного штамма atfA .

Подробнее »

Расширять

Фигура 2.


Стратегия конструирования штамма atfA , дополненного.

(A) Карта рестрикции демонстрирует сайты узнавания Eco RV (EV) и Bss SI (BsI), использованные в Саузерн-блот-анализе для обнаружения присутствия гена atfA в штамме atfA , комплементарном (AC1). ) по сравнению со штаммом дикого типа (WT). Серая полоса указывает положение зонда, характерное для ген atfA . (B) Саузерн-блот-гибридизация геномной ДНК из штаммов дикого типа (F4) и atfA -комплементированных (AC1) штаммов с использованием зонда на рисунке 2A. Зонд (фрагмент atfA размером 0,9 т.п.н.) гибридизировался с фрагментом 5,6 т.п.н. и непредсказуемым фрагментом (фрагмент 10,0 т.п.н.) Eco RV- и BssSI-расщепленной ДНК из штамма дикого типа, соответственно. Для штамма , комплементарного atfA , зонд гибридизировался с непредсказуемым фрагментом (фрагмент 3,5 т. п.н.) и фрагментом 9,5 т.п.о.0017 Eco ДНК, расщепленная RV и BssSI, из штамма , комплементированного atfA , соответственно.

Подробнее »

Расширять

Рисунок 3.

Экспрессия atfA во время фазового перехода.

РНК была выделена из клеток P. marneffei штамма F4, включая конидии, собранные из культур, выращенных в течение семи дней на PDA при 25°C, трех дней в SDB при 25°C (мицелий) и шести дней в бульоне BHI при 37 °С (дрожжи). 18S рРНК использовали в качестве контроля загрузки каждой фазы роста.

Подробнее »

Расширять

Рисунок 4.

Морфология мутанта P. marneffei atfA по сравнению со штаммом дикого типа.

(A) Колонии дикого типа (F4) и мутанта atfA (SC) на КПК инкубировали при 25°C в течение семи дней. (B-D) Конидии, выделенные из дикого типа (F4) и мутанта atfA (SC), инокулировали на SDA и SDB и инкубировали при 37°C в течение десяти и шести дней соответственно. Масштабная линейка соответствует пяти микрометрам.

Подробнее »

Расширять

Рисунок 5.

Восприимчивость к окислительному стрессу P. marneffei .

Рост P. marneffei дикого типа (F4), мутанта atfA (SC) и штамма atfA , комплементарного (AC1) при 25°C и 37°C на MM-агаре с добавлением 2 и 0,5 мМ t -BOOH (B и F), 2 и 1 мМ H 2 O 2 (C и G) и 0,25 мМ и 25 мкМ менадиона (D и H). Пять микролитров клеточных разведений (5×10 4 до 5 клеток) инокулировали на MM-агар, содержащий каждое соединение. (A) и (E) представляют контрольные пластины MM при 25°C и 37°C соответственно.

Подробнее »

Расширять

Рисунок 6.


Ген atfA не участвует в реакциях на осмотический и тепловой стресс у P. marneffei .

Пять микролитров клеточных разведений (5×10 4 на 5 клеток) дикого типа (F4), 9Штаммы 0017 atfA mutant (SC) и atfA комплементарные (AC1) штаммы инокулировали на MM-агар с добавлением 0,5 и 0,25 M NaCl (B и E) и 1 M сорбита (C и F). (G) Агар MM инкубировали при 39°C. (A) и (D) представляют контрольные пластины MM при 25°C и 37°C соответственно.

Подробнее »

Расширять

Рисунок 7.

Экспрессия генов и выживание P. marneffei при тепловом стрессе при 42°C.

(A) Относительная экспрессия РНК генов sakA и atfA конидий из P. marneffei дикого типа, определенная с помощью ПЦР в реальном времени. Конидии инкубировали при 42°С в течение 10, 20, 30 или 40 минут. Тотальную РНК выделяли из конидий и подвергали ПЦР в реальном времени. Уровень экспрессии клеток теплового стресса представлен как относительное значение уровня экспрессии клеток без стресса, которому присвоено значение 1. Уровень экспрессии гена GAPDH использовали для нормализации количества вводимой РНК. (B) Выживание конидий с P. marneffei дикого типа (WT), мутант atfA (Δ atfA ) и комплементарные штаммы (Δ atfA + atfA ) после инкубации в BHI при 42°C в течение одного часа. (C) Относительный уровень экспрессии РНК гена atfA конидий из P. marneffei дикого типа (WT), мутанта sakA (Δ sakA ). Конидии инкубировали при 42°C в течение 20 минут, выделяли тотальную РНК и подвергали ПЦР в реальном времени. Результаты были получены из трех независимых экспериментов, и показаны стандартные планки ошибок средних баров (p<0,05).

Подробнее »

Расширять

Рисунок 8.


Делеция atfA не влияет на отложение хитина и целостность клеточной стенки.

(A) P. marneffei дикого типа (F4), atfA мутантный (SC) и atfA комплементарный (AC1) штаммы выращивали в течение семи дней при 25°C на PDA и окрашивали CFW на четвертый день и день седьмой, чтобы визуализировать клеточную стенку и перегородки. Масштабная линейка соответствует пяти микрометрам. (от B до M) пять микролитров клеточных разведений (5×10 4 –5 клеток) дикого типа, мутантных штаммов atfA и комплементарных штаммов atfA инокулировали на среды с добавлением 5 мкг/мл CFW (C и I), 0,004% SDS (D и J), 10 мкг/мл. мл и 4 мкг/мл амфотерицина В (F и L) и 8 мкг/мл и 0,8 мкг/мл итраконазола (G и M). (B и E) и (H и K) представляют контрольные чашки ММ при 25°C и 37°C соответственно.

Подробнее »

Расширять

Рисунок 9.


Восприимчивость конидий P. marneffei дикого типа, мутанта sakA (Δ sakA ) и мутанта atfA (Δ atfA ) к УФ-излучению.

Конидии каждого штамма высевали в двух экземплярах на SDA и подвергали воздействию различного УФ-излучения при 0, 2000, 4000, 6000 и 8000 микроджоулей/см 2 . Данные взяты из трех независимых экспериментов, и показаны стандартные планки ошибок средних баров (p<0,05).

Подробнее »

Расширять

Рисунок 10.

Выживание P. marneffei внутри макрофага.

Макрофаги мыши (A) и человека (B) были инфицированы конидиями P. marneffei дикого типа (F4), мутанта atfA (Δ atfA ) и atfA , комплементированного (Δ 907 + atf2A atfA ). Процент восстановления рассчитывали по количеству колоний, восстановленных через два часа и 24 часа после заражения. Данные взяты из трех независимых экспериментов, и показаны стандартные планки ошибок средних баров (p<0,05).

Подробнее »

Расширять

AtfA, новый фактор глобальной регуляции транскрипции у Acinetobacter spp

. 2014 сен; 93 (6): 1130-43.

дои: 10.1111/mmi.12723.

Epub 2014 31 июля.

Райан Уизерс
1
 , Джефф П. Доэрти, Мэтью Джордан, Сяо Ян, Николас Э. Диксон, Питер Дж. Льюис

Принадлежности

принадлежность

  • 1 ​​ Школа наук об окружающей среде и жизни, Университет Ньюкасла, Каллаган, Новый Южный Уэльс, Австралия.

  • PMID:

    25047957

  • DOI:

    10.1111/мм.12723

Бесплатная статья

Райан Уизерс и др.

Мол микробиол.

2014 Сентябрь

Бесплатная статья

. 2014 сен; 93 (6): 1130-43.

дои: 10.1111/mmi.12723.

Epub 2014 31 июля.

Авторы

Райан Уизерс
1
 , Джефф П. Доэрти, Мэтью Джордан, Сяо Ян, Николас Э. Диксон, Питер Дж. Льюис

принадлежность

  • 1 ​​ Школа наук об окружающей среде и жизни, Университет Ньюкасла, Каллаган, Новый Южный Уэльс, Австралия.

  • PMID:

    25047957

  • DOI:

    10.1111/мм.12723

Абстрактный

Виды Acinetobacter широко распространены в окружающей среде и недавно получили известность как условно-патогенные внутрибольничные патогены. Здесь мы характеризуем новый белок, взаимодействующий с РНК-полимеразой, названный кислым фактором транскрипции A, AtfA. Он небольшой и имеет высокую кислотность и широко распространен среди γ-протеобактерий, включая другие важные патогены из родов Moraxella, Pseudomonas, Legionella и Vibrio. У модельного вида A. baylyi ADP1 делеция atfA значительно влияет на экспрессию более 500 генов, что приводит к крупноклеточному фенотипу, снижению приспособленности клеток, нарушению образования биопленки и подергивающейся подвижности, а также к повышенной чувствительности к антибиотикам. Делеция atfA также вызывает резкое повышение чувствительности к этанолу, который является важным стимулятором роста и фактором вирулентности Acinetobacter spp. Результаты показывают, что вспомогательные факторы РНК-полимеразы, играющие важную биологическую роль, еще предстоит открыть.

© 2014 John Wiley & Sons Ltd.

Похожие статьи

  • CatM регуляция оперона benABCDE: функциональное расхождение двух паралогов LysR-типа в Acinetobacter baylyi ADP1.

    Ezezika OC, Collier-Hyams LS, Dale HA, Burk AC, Neidle EL.
    Эзезика О.С. и соавт.
    Appl Environ Microbiol. 2006 март; 72(3):1749-58. doi: 10.1128/AEM.72.3.1749-1758.2006.
    Appl Environ Microbiol. 2006.

    PMID: 16517618
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Продукция триацилглицеролов в Escherichia coli путем делеции гена диацилглицеролкиназы и гетерологичной сверхэкспрессии atfA из Acinetobacter baylyi ADP1.

    Янсен Х.Й., Штайнбюхель А.
    Janßen HJ и соавт.
    Приложение Microbiol Biotechnol. 2014 фев; 98 (4): 1913-24. doi: 10.1007/s00253-013-5460-2. Epub 2014 5 января.
    Приложение Microbiol Biotechnol. 2014.

    PMID: 24389701

  • Молекулярная характеристика гена, кодирующего новую бета-лактамазу AmpC у Acinetobacter baylyi.

    Бесейро А., Перес-Лларена Ф.Х., Перес А., Томас Мдель М., Фернандес А., Малло С., Вильянуэва Р., Боу Г.
    Бесейро А. и соавт.
    J Антимикробная химиотерапия. 2007 г., май; 59(5):996-1000. doi: 10.1093/jac/dkm070. Epub 2007 2 апр.
    J Антимикробная химиотерапия. 2007.

    PMID: 17403709

  • Глобальные регуляторы транскрипции у Escherichia coli: механизмы действия и методы изучения.

    Грейнджер, округ Колумбия, Басби С.Дж.
    Грейнджер, округ Колумбия, и соавт.
    Adv Appl Microbiol. 2008;65:93-113. doi: 10.1016/S0065-2164(08)00604-7.
    Adv Appl Microbiol. 2008.

    PMID: 163

    Обзор.

    Аннотация недоступна.

  • Чувство кворума у ​​Acinetobacter: новый патоген.

    Бхаргава Н., Шарма П., Капалаш Н.
    Бхаргава Н. и др.
    Crit Rev Microbiol. 2010 ноябрь;36(4):349-60. doi: 10.3109/1040841X.2010.512269.
    Crit Rev Microbiol. 2010.

    PMID: 20846031

    Обзор.

Посмотреть все похожие статьи

Цитируется

  • Специфический для покоя регулятор, SutA, по своей природе неупорядочен и модулирует инициацию транскрипции у Pseudomonas aeruginosa.

    Бергкессель М., Бабин Б.М., ВандерВельде Д., Свередоски М.Дж., Морадян А., Эгглстон-Рейнгель Р., Хесс С., Тиррелл Д.А., Арцимович И., Ньюман Д.К.
    Бергкессель М. и соавт.
    Мол микробиол. 2019 сен; 112 (3): 992-1009. doi: 10.1111/mmi.14337. Epub 2019 10 июля.
    Мол микробиол. 2019.

    PMID: 31254296
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Белки контактно-зависимого ингибирования роста Acinetobacter baylyi ADP1.

    Де Грегорио Э., Эспозито Э.П., Заррилли Р., Ди Носера ПП.
    Де Грегорио Э. и др.
    Карр микробиол. 2018 ноябрь;75(11):1434-1440. doi: 10.1007/s00284-018-1540-y. Epub 2018 17 июля.
    Карр микробиол. 2018.

    PMID: 30019131
    Бесплатная статья ЧВК.

  • Генетическая регуляция вирулентности и устойчивости к антибиотикам Acinetobacter baumannii.

    Крегер К., Кэри С.К., Шауэр К., Кэмерон А.Д.
    Крегер С. и соавт.
    Гены (Базель). 2016 28 декабря; 8 (1): 12. дои: 10.3390/гены8010012.
    Гены (Базель). 2016.

    PMID: 28036056
    Бесплатная статья ЧВК.

    Обзор.

  • SutA представляет собой бактериальный фактор транскрипции, экспрессируемый во время медленного роста Pseudomonas aeruginosa.

    Бабин Б.М., Бергкессель М., Свередоски М.Дж., Морадян А., Хесс С., Ньюман Д.К., Тиррелл Д.А.
    Бабин Б.